GB∕T 38133-2019 转基因苜蓿实时荧光PCR检测方法
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ID： |
28D3893B8678435AA49B120DFFF81525 |
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文件大小(MB)： |
0.97 |
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页数： |
10 |
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文件格式： |
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日期： |
2024-8-14 |
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ICS 07.080,A 40 OB,中华人民共和国国家标准,GB/T 38133—2019,转基因苜蓿实时荧光PCR检测方法,Genetically modified alfalfa detection method by real-time PCR,2019-10-18 发布2019-10-18 实施,国家市场监督管理总局尖布,中国国家标准化管理委员会发布,GB/T 38133—2019,-1— 刖 R,本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草,本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC 387)提出并归口,本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、广州海关技术中心、广西出入境检验检疫局检验检疫,技术中心、辽宁出入境检验检疫局检验检疫技术中心,本标准主要起草人:付伟、朱鹏宇、刘津、魏霜、杜智欣、王晨光、朱水芳、黄文胜、郑秋月、曹际娟,I,GB/T 38133—2019,转基因苜蓿实时荧光PCR检测方法,范围,本标准规定了苜蓿转基因成分的实时荧光聚合酶链式反应（PCR）定性检测方法,本标准适用于种子、饲料中的转基因苜蓿J1O1.J163以及KK179品系的实时荧光PCR方法检测,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法,GB/T 19495.1,GB/T 19495.2,GB/T 19495.3,GB/T 19495.7,转基因产品检测,转基因产品检测,转基因产品检测,转基因产品检测,通用要求和定义,实验室技术要求,核酸提取纯化方法,抽样和制样方法,3术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,3.1,ACC 基因 acetyl CoA carboxylase,编码乙酰辅酶A般化酶的基因,注:在本标准中作为苜蓿的内标准基因,3.2,18S 核糖体 RNA 18S rRNA,编码真核生物18S核糖体RNA的基因,注1:在本标准中作为苜蓿的内标准基因,注2:实际检测中,3.1和3.2选择ー种使用即可,3.3,FMV35S 启动子 35S promoter from a modified Figwort mosaic virus,编码玄参花叶病毒的35s启动子的基因,注:在本标准中作为转基因苜蓿J101和J163的启动子,3.4,E9 终止ナ 3ztermination region from pea ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase,来源于源自豌豆核酮糖ー1,5一二磷酸竣化酶小亚基（K6cS）E9基因的3‘非翻译区,存在于转基因苜,蓿J101与J163品系中,3.5,CP4-EPSPS 基因 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene,源自Agrobacterium CP4菌株,用于编码莽草酸途径中的关键醉的基因,存在于转基因苜蓿J101,与J163品系中,1,GB/T 38133—2019,CTP2 基因 chloroplast transit peptide coding sequence,源自Arabidopsis thaliana EPSPS的叶绿体转运肽,用于引导CP4-EPSPS蛋白在芳香族氨基酸,合成的基因,3.7,NOS 终止子 nos terminator,来自根癌农杆菌pTi的胭脂碱合酶Sos）基因的3'UTR序列区,用于编码NOS,指导聚腺甘酸化,的基因,存在于转基因苜蓿KK179品系中,3.8 _____,Pal2 启动子 Papromoteンザニニ二丒一 . 一 一ニニ「靠」,来自菜豆的Pa/2基町动武含有噌那鶴3唯鹫勺编码粘&や解氨酶的基因,存在于转基,因苜蓿KK179品系中。r、,4试验原理,应用TaqMan,探针キ,源基因序歹典か物和1,号的累积,PC券物形,E pcK反日,黨否、有,序列和苜蓿内,ド程中,荧光信,卜的基因,5试剂与材料,5.1 DNA提取试剂盒,5.2 实时荧光BpR预混箱,5.3 内标進理因台!物和埃,5.3.1 ACC宝因引物礴,上游引物 A^CCXd,-GATCAGTGAACTTCGCAAAGTAC-3z,下游引物 A^-R%kCA ACGACGTGA AC ACT ACA AC-3 ,探针 ACC-P ：^^G^^CTCCTGTGATCTGCCCATGC-3z,5.3.2 18S rRNA基帥曲4軀 J 丄^,上游引物18S-F：5'-C GAA.,下游引物 18S-R ： 5〈CGTGTC A 条中 TTGGGT A AT-3,探针 !8S-P ： 5 ^TGCGCGCCTGCTG^^n^^^,5.4 外源基因引物和探针（探针5’端标记荧光基团,3’端标记荧光淬灭基团）,5.4.1 J101转化事件特异性序列引物和探针:,上游引物 J1O1-F：5'-GTACTGATCTTGTGTCATAGTTTC-3',下游引物 J1O1-R：5'-ACTGAGAATTAGCTTCCACTC-3',探针 J101-P ： 5ACTGAAGGCGGGAAACGACAATCT-3',5.4.2 J163转化事件特异性序列引物和探针:,上游引物 J163-F：5'-GCCGGGACAAGGTCATC-3',下游引物 J163-R ： 5 Z-TGG ACTG AG A ATT AGCTTCCAC-3',探针 J163-P ： 5'-TGAAGTGTTC……
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